高等学校化学学报 ›› 2012, Vol. 33 ›› Issue (11): 2486.doi: 10.7503/cjcu20120308
邓龙, 肖治理, 董洁娴, 王弘, 杨武英, 谢曦, 杨金易, 沈玉栋, 孙远明
DENG Long, XIAO Zhi-Li, DONG Jie-Xian, WANG Hong, YANG Wu-Ying, XIE Xi, YANG Jin-Yi, SHEN Yu-Dong, SUN Yuan-Ming
摘要:
为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv), 从抗CBF scFv氨基酸序列出发, 通过同源模建获得抗体模型, 找出抗体中的活性口袋区域, 进而将小分子药物与抗体进行分子对接, 发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用. 进一步对口袋内亲水氨基酸残基HArg40和LHis38进行模拟替换, 再进行分子对接分析, 发现当以亮氨酸为突变氨基酸时, 对接评分最高. 在此基础上, 通过构建突变scFv基因及可溶性表达, 采用ELISA法对进化后的单链抗体(evoscFv)进行了鉴定. 结果表明, evoscFv对CBF的IC50值为18.11 μg/L, 低于野生型抗体的27.25 μg/L, 亲和解离常数Kd为4.06×10-8 mol/L, 相对亲和力比野生型scFv提高了2.23倍, 说明通过分子对接分析及对抗体活性口袋中氨基酸残基进行替换, 获得了一个亲和力更高的突变体抗体.
中图分类号:
TrendMD: