N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯柱前衍生高效液相色谱分离及荧光测定肽及其水解物

高等学校化学学报 ›› 1997, Vol. 18 ›› Issue (6): 873.

N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯柱前衍生高效液相色谱分离及荧光测定肽及其水解物

刘勋, 徐国良, 张华山, 程介克

武汉大学化学系, 武汉, 430072, 江西江中制药厂

收稿日期:1996-06-14 出版日期:1997-06-24 发布日期:1997-06-24
通讯作者: 张华山.
作者简介:刘勋, 男, 30岁, 博士研究生.
基金资助:
国家自然科学基金

Analysis of Peptides and Amino Acids by Pre-column Derivatization High Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection

LIU Xun, XU Guo-Liang, ZHANG Hua-Shan, CHENG Jie-Ke

Department of Chemistry, Wuhan University, Wuhan, 430072

Received:1996-06-14 Online:1997-06-24 Published:1997-06-24

摘要/Abstract

摘要： 本文首次报道了一种新的羧酸活性酯试剂,N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯作为柱前荧光衍生试剂,流动相为10mmol/L柠檬酸-Na₂HPO₄－pH 3.6的甲醇/水(20/80,V/V)溶液,C₁₈柱,于λ_cx/λ_cm＝278nm/355nm处进行荧光检测,高效液相色谱分离测定了谷胱甘肽、二甘肽、谷氨酸、胱氨酸、甘氨酸.当S/N＝3时,检出限为0.2至2.5Pmol.

关键词: 活性酯试剂, 荧光衍生, 高效液相色谱, 肽, 氨基酸

Abstract: Anew activated ester fluorescence derivatization reagent, N-hydroxysucci-nimidyl-3-indolylacetate(SIIA) is used for analysis of small peptides and their hydrolysates by HPLCand fluorescence detection. In a one-step procedure, SIIAreacts with peptides and amino acids to form stable derivatives. Studies on derivatization conditions demonstrate ex-cellent derivative properties of the reagent. Maximal yields are observed with a molar reagent excess of approximately twenty five or greater and heated at 60℃ for 10 min in pH 8.0 buffer. SIIAderivatives of glutathionide, diglycine, glutamic acid, cystine and glycine are separated on C₁₈, reverse-column with the mobile phase of CH₃OH/H₂O (20/80, V/V)containing 10mmol/LpH 3.6 citric acid-Na₂HPO₄ buffer. They are detected at λ_cx/λ_cm＝278 nm/355 nm with the detection limits ranged from 0. 2 pmol to 2. 5 pmol.

Key words: Activated ester reagent, Fluorescence derivatization, High performance liquid chromatography, Peptides, Amlno acids

TrendMD:

刘勋, 徐国良, 张华山, 程介克. N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯柱前衍生高效液相色谱分离及荧光测定肽及其水解物. 高等学校化学学报, 1997, 18(6): 873.

LIU Xun, XU Guo-Liang, ZHANG Hua-Shan, CHENG Jie-Ke. Analysis of Peptides and Amino Acids by Pre-column Derivatization High Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection. Chem. J. Chinese Universities, 1997, 18(6): 873.

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