高等学校化学学报 ›› 1996, Vol. 17 ›› Issue (11): 1673.
孙雨龙1, 王韵华1, 周刚1, 黄仲贤1, 谢毅2, 吴小舟2
SUN Yu-Long1, WANG Yun-Hua1, ZHOU Gang1, HUANG Zhong-Xian1, XIE Yi2, WU Xiao-Zhou2
摘要: 用寡聚核苷酸定点突变的方法将牛肝细胞色素b5基因(编码亲水结构域82个残基)上第44位和56位谷氨酸的密码子GAA变成丙氨酸的密码子GCT,获得突变体E44A、E56A和E44/56A的基因。将它们分别克隆于pUC19上,转化大肠杆菌JM83后,突变基因得到成功的表达。将含细胞色素b5及其突变体基因的大肠杆菌发酵,酶法裂解细菌,依次用硫酸铵沉淀法、离子交换柱层析、凝胶柱层析进行分离纯化蛋白。用Chou-Fasman法、紫外可见光谱、圆二色谱研究蛋白质,发现定点突变细胞色素b5表面上这2个氨基酸残基对蛋白质的局部二级结构无明显影响。
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