高等学校化学学报 ›› 2012, Vol. 33 ›› Issue (09): 1945.doi: 10.3969/j.issn.0251-0790.2012.09.012
刘金权1,2,4, 倪小祺1,2,4, 何晓晓1,2,4, 王永红2,3,4, 王柯敏1,2,3,4, 陈智峰1,2,4, 苏婧1,2,4, 晏根平2,3,4
LIU Jin-Quan1,2,4, NI Xiao-Qi1,2,4, HE Xiao-Xiao1,2,4, WANG Yong-Hong2,3,4, WANG Ke-Min1,2,3,4, CHEN Zhi-Feng1,2,4, SU Jing1,2,4, YAN Gen-Ping2,3,4
摘要:
基于金纳米颗粒(AuNPs)比表面积大、 尺寸小和能够承载大量DNA片段的特点, 建立了一种免标记、 简便、 快速检测DNA聚合酶Klenow fragment exo-(KF-)的电化学方法. 首先将巯基化的DNA引物片段修饰在金电极上, 然后加入模板DNA链以及修饰有报告DNA链的金纳米颗粒(AuNPs-DNA), 模板DNA链能同时与DNA引物片段和修饰在AuNPs上的报告DNA链进行互补杂交形成"三明治"结构, 从而将AuNPs-DNA修饰在电极表面; 当加入电活性物质钌铵(RuHex)后, RuHex可通过静电吸附作用结合在DNA上. AuNPs上修饰的报告DNA链能够吸附大量RuHex, 导致电化学信号放大. 当加入脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)以及KF-聚合酶后, 引物片段发生延伸反应, 将与模板DNA链杂交的AuNPs-DNA竞争下来, 带走大量的RuHex, 使电信号降低, 从而实现对聚合酶的检测. 实验结果表明, 利用该方法可以检测到5 U/mL的KF-.
中图分类号:
TrendMD: