具有cGPX活力的含硒抗体酶的酶学及动力学性质研究

高等学校化学学报 ›› 2000, Vol. 21 ›› Issue (11): 1621.

具有cGPX活力的含硒抗体酶的酶学及动力学性质研究

吴一卉², 马雪艳¹, 丁兰¹, 刘兰英², 赵大庆¹, 倪嘉缵¹

1. 中国科学院长春应用化学研究所, 稀土物理与化学开放实验室, 长春 130022;
2. 吉林大学生命科学学院, 分子生物学系, 长春 130023

收稿日期:1999-08-16 出版日期:2000-11-24 发布日期:2000-11-24
通讯作者: 赵大庆(1963年出生),男,博士,研究员,主要从事生物无机化学研究.
基金资助:
国家自然科学基金(批准号:29701005);中国科学院基础局重大项目(批准号:KJ951-A1-504-02)资助

Enzymatic and Kinetic Properties of Selenium-containing Catalytic Antibody with cGPX Activity

WU Yi-Hui², MA Xue-Yan¹, DING Lan¹, LIU Lan-Ying², ZHAO Da-Qing¹, NI Jia-Zuan¹

1. Open Laborotaryof Rare Earth Chemistryand Physics, Changchun Instituteof Applied Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Changchun 130022, China;
2. Depa rtment of Molecular Biology, College of Life Science, Jilin University, Changchun 130023, China

Received:1999-08-16 Online:2000-11-24 Published:2000-11-24

摘要/Abstract

摘要： 通过单克隆抗体制备技术得到三株特异结合半抗原4(GSH-S-DNP二苄酯)的单克隆抗体HB4,HB5和HB7.抗体经两步化学诱变得到具有细胞谷胱甘肽过氧化物酶(cGPX)活性的含硒抗体酶mHB4,mHB5和mHB7,活力分别为170,1867,32U/μmol.其中mHB5的活力是天然兔肝cGPX的0.32倍,m4A4的1.51倍.等离子体-质谱(ICP/MS)测得每分子含硒抗体酶分子中大约存在2个硒原子.mHB5的最适pH为8.6～8.8.在pH值范围为7.0和37℃条件下,mHB5催化GSH和H₂O₂或t-ROOH反应的二级速率常数为:_k+1(H₂O₂)9.71×10⁶L/(mol·min),_k+1(t-ROOH)5.99×10⁵L/(mol·min).mHB5使非酶催化反应速率提高了9.8×10⁶和3.7×10⁵倍.

关键词: 单克隆抗体, 含硒抗体酶, 谷胱甘肽过氧化物酶

Abstract: Three selenium-containing catalytic antibodies mHB4, mHB5 and mHB7, which acted as mimics of cytosolic glutathione peroxidase(cGPX), were prepared by chemically introducing selenium into monoclonal antibodies HB4, HB5 and HB7. HB4, HB5 and HB7 were raised against a GSH derivative GSH S DNP dibenzyl ester. The cGPX activity of mHB4, mHB5, mHB7 were 170, 1 867, 32 U/μmol, respectively. The cGPX activity of mHB5 was 0.32 fold of natural rabbit liver cGPX and 1.51 fold of m4A4. About two atoms of selenium existed in each of mHB5 molecule determined by inductively-coupled plasma/mass spectroscopy(ICP-MS). The optimal activity of mHB5 was at between pH 8.4 and 8.8. The reaction catalyzed by mHB5 involved a Ping Pong mechanism. At pH 7.0 and 37 ℃, the apparent second order rate constants for reaction of mHB5 with H₂O₂ and t ROOH were as followed: _k+1 (H₂O₂)=9.71×10⁶ L/(mol·min), _k+1 ( t ROOH)=5.99×10⁵ L/(mol·min). Rate accelerations( k_cat / K_m/ k_uncat ) 9.8×10⁶ and 3.7×10⁵ fold those of the uncatalytic reaction were observed.

Key words: Monoclonal antibody, Selenium-containing catalytic antibody, Glutathione peroxidase

中图分类号:

R392.11

TrendMD:

吴一卉, 马雪艳, 丁兰, 刘兰英, 赵大庆, 倪嘉缵. 具有cGPX活力的含硒抗体酶的酶学及动力学性质研究. 高等学校化学学报, 2000, 21(11): 1621.

WU Yi-Hui, MA Xue-Yan, DING Lan, LIU Lan-Ying, ZHAO Da-Qing, NI Jia-Zuan, . Enzymatic and Kinetic Properties of Selenium-containing Catalytic Antibody with cGPX Activity. Chem. J. Chinese Universities, 2000, 21(11): 1621.

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