光/还原双重响应水凝胶微球的制备及在细胞三维(3D)培养中的应用

doi:10.7503/cjcu20220116

摘要/Abstract

摘要：

设计合成了一种光/还原双响应水凝胶微球，该微球可在温和的刺激条件下实现三维(3D)细胞的大规模培养和无酶无损捕获. 水凝胶微球组分中包含一个双响应功能单体(M1)，其中邻硝基苄酯功能基团可在紫外光照下与氨基化合物发生光偶联作用，从而在水凝胶微球表面实现黏附蛋白的有效固定，并通过蛋白质-整合素相互作用介导细胞的黏附. 微球表面细胞生长增殖后，其中的二硫键基团可被谷胱甘肽还原，从而介导细胞无酶无损温和释放. 这种通过调节水凝胶微球表面生物活性分子的固定与释放介导细胞黏附与捕获的新方法为细胞工程提供了一种通用而有效的手段.

关键词: 水凝胶微球, 三维细胞培养, 双重刺激响应, 细胞黏附与释放

Abstract:

A kind of photo/reduction dual-responsive hydrogel microsphere was designed and prepared to achieve scalable three-dimensional（3D） cell culture and enzyme free harvest under mild conditions. The hydrogel microsphere contains a dual-responsive functional monomer（M1）， in which the functional groups of ortho-nitrobenzyl ester can ligate with amino compounds under ultraviolet（UV） irradiation， thus achieving effective immobilization of adhesive proteins on the surface of hydrogel microspheres and mediating cell adhesion through protein-integrin interaction. After the growth and proliferation of cells on the surface of microspheres， the disulfide bond group can be reduced by glutathione， which mediates the non-enzymatic and non-destructive release of cells. Such a novel method that regulates cell adhesion and release by immobilization and release of bioactive molecules on the surface of hydrogel microspheres provides a universal and effective strategy for cell engineering.

Key words: Hydrogel microspheres, Three-dimensional（3D） cell culture, Dual stimuli-responsive, Cell adhesion and release

中图分类号:

O631

TrendMD:

王学斌, 薛源, 茆华女, 项艳鑫, 包春燕. 光/还原双重响应水凝胶微球的制备及在细胞三维(3D)培养中的应用. 高等学校化学学报, 2022, 43(8): 20220116.

WANG Xuebin, XUE Yuan, MAO Hua’nyu, XIANG Yanxin, BAO Chunyan. Preparation of Photo/reduction Dual-responsive Hydrogel Microspheres and Their Application in Three-dimensional Cell Culture. Chem. J. Chinese Universities, 2022, 43(8): 20220116.

图/表 8

Fig.1 FTIR?ATR spectra of M1, hydrogelmicrospheres DRG and NRG

Fig.2 SEM images of xerogel microspheres by W/O emulsion method(A， B) and confocal microscope images of Rho?BSA immobilized hydrogel microspheres(C, D)

Fig.3 HUVEC cell viability of hydrogel microsphere after coculturing for 1, 3 and 5 d

Fig.4 Confocal images of hydrogel microspheres with HUVEC cells adhesion(A—C) and cell proliferation of HUVEC on the Rho?gelatin immobilized microsphers from 1 d to 5 d(D)(A)―(C) The images from fluorescence fields[(A) λex=488 nm; (B) λex=561 nm] and the bright field, respectively.

Fig.5 3D Confocal images of HUVEC adhesion on the surface of hydrogel microspheres after coculturing for 3D(A) From top to bottom are the Z?axis overlayed images of fluorescent field(λex=488 nm) and bright field; (B) from left to right are section images of fluorescent field(λex=488 nm) and bright field in Z?axis direction; (C) from top to bottom are the images of fluorescent field(λex=488 nm) and bright field.

Fig.6 Time?course of cell detachment on hydrogel microspheres upon GSH stimuli with different time

Fig.7 Time?course of the detachment percentage of adhesive cells on hydrogel microspheres upon GSH stimuliTime/min: (A) 0; (B) 30; (C) 60; (D) 90.The initial percentage of adhesive cells was defined as 100%, three independent samples were explored.

Fig.8 Proliferation analysis for the detached cells from hydrogel microspheres

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