Ce-Cur纳米酶对巨噬细胞极化的调控

doi:10.7503/cjcu20250188

摘要/Abstract

摘要：

以氯化铈(CeCl₃)和姜黄素(Cur)为原料, 以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为分散剂, 设计合成了无机-有机复合型Ce-Cur纳米酶. 采用X射线粉末衍射(XRD)、透射电子显微镜(TEM)、 X射线光电子能谱(XPS)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、 Zeta电位及粒度分析等手段对其微观结构和表面性质进行了表征. 通过ABTS和DPPH自由基清除实验评价了该纳米酶的体外抗氧化活性, 并利用DCFH-DA荧光探针法检测了其对巨噬细胞内活性氧物种(ROS)的清除能力. 结果表明, Ce-Cur纳米酶具有良好的抗氧化能力, 可显著降低细胞内ROS水平(荧光强度MFI下降53%). CCK8 法与死活荧光染色实验显示, 该纳米酶具有良好的细胞相容性. 实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、免疫荧光及ELISA分析数据显示, Ce-Cur纳米酶能够有效抑制由LPS+IFN-γ诱导的炎症反应, 下调M1型炎症因子TNF-α, IL-1β和IL-6的mRNA表达与蛋白分泌(M1抑制率分别为57%, 67%和82%), 同时促进M2型抗炎因子IL-10的表达(M2提升率达351%). 上述结果表明, 姜黄素与无定形氧化铈组分之间存在协同抗氧化与抗炎效应, 可显著调控巨噬细胞由M1向M2表型极化. 本研究为Ce-Cur纳米酶在免疫调节及相关炎症疾病治疗领域的应用提供了实验依据与潜在策略.

关键词: Ce-Cur纳米酶, 巨噬细胞, M1促炎因子, M2抗炎因子, 极化作用

Abstract:

This study designed and synthesized an inorganic-organic composite Ce-Cur nanoenzyme using cerium chloride（CeCl₃） and curcumin（Cur） as raw materials， with polyvinylpyrrolidone（PVP） as the dispersant. Systematic characterization of its microstructure and surface properties was performed using X-ray powder diffraction（XRD）， transmission electron microscopy（TEM）， X-ray photoelectron spectroscopy（XPS）， Fourier transform infrared spectroscopy（FTIR）， zeta potential， and particle size analysis. In vitro antioxidant activity was evaluated via ABTS and DPPH radical scavenging assays， while DCFH-DA fluorescence probe-based assays assessed its ability to scavenge reactive oxygen species（ROS） within macrophages. Results indicate that the Ce-Cur nanozyme exhibits excellent antioxidant capacity， significantly reducing intracellular ROS levels（fluorescence intensity MFI decreased by 53%）. CCK8 assays and live/dead fluorescent staining experiments demonstrated excellent cellular compatibility of the nanozyme. Real-time quantitative PCR（RT-qPCR）， immunofluorescence， and ELISA analyses revealed that Ce-Cur nanozyme effectively suppressed LPS+IFN-γ-induced inflammatory responses. It downregulated mRNA expression and protein secretion of M1-type inflammatory cytokines TNF-α， IL-1β， and IL-6（M1 inhibition rates were 57%， 67%， and 82%， respectively.）， while simultaneously promoting the expression of the M2 anti-inflammatory factor IL-10（M2 growth rate reached 351%）. These results indicate synergistic antioxidant and anti-inflammatory effects between curcumin and amorphous cerium oxide components， significantly regulating macrophage polarization from the M1 to the M2 phenotype. This study provides experimental evidence and potential strategies for the application of Ce-Cur nanoenzymes in immunomodulation and the treatment of related inflammatory diseases.

Key words: Ce-Cur nanoenzymes, Macrophage, M1-type inflammatory factor, M2-type anti-inflammatory factor, Polarization

中图分类号:

O611.4

TrendMD:

许海燕, 刘琦, 孟和, 刘风琦, 刘雨昕, 李嘉伟, 李常艳. Ce-Cur纳米酶对巨噬细胞极化的调控. 高等学校化学学报, 2025, 46(12): 20250188.

XU Haiyan, LIU Qi, MENG He, LIU Fengqi, LIU Yuxin, LI Jiawei, LI Changyan. Regulation of Macrophage Polarization by Ce-Cur Nanoenzymes. Chem. J. Chinese Universities, 2025, 46(12): 20250188.

图/表 8

Fig.1 XRD patterns(A), FTIR spectra(B), EDX spectra(C), TEM image(D), hydrated particle size(E) and zeta potentials(F) of Ce⁃Cur nanozymes（D） Inset： TEM particle size distribution.

Fig.2 XPS survey spectra(A) of Ce⁃Cur nanozymes and Cur nanozymes, fine⁃scan XPS spectra of O1s (B), C1s (C) of Cur, and fine⁃scan XPS spectra of Ce3d (D), O1s (E), C1s (F) of Ce⁃Cur

Fig.3 Cell viability of RAW264.7 cells determined by CCK⁃8 assays for Cur(A), Ce⁃Cur(B), and Calcein/PI dead⁃acting staining to detect the effects of different nanozymes on RAW264.7 cells(C)Data are mean ± SD（n=3）； *P<0.05， **P<0.01 vs. 0 μg/mL.

Fig.4 Free radical scavenging activity of Ce⁃Cur on DPPH (A) and ABTS (B), ROS fluorescence quantitative analysis (C) and detection of ROS scavenging ability in macrophages by Ce⁃Cur nanozymes (D—G)Data are mean ± SD（n=3）； scale bar： 100 μm； ####P<0.0001， ###P<0.001 vs. Control group， *P<0.05， **P<0.01， ***P<0.001， ****P<0.0001 vs. LPS+IFN-γ group； ns indicates no statistical significance.

Fig.5 Fluorescence confocal bright field images of morphology of RAW264.7 cells(A, B) 20 Times magnification control and LPS+IFN-γ stimulation of RAW264.7 cells; (C, D) 40 times magnification control and LPS+IFN-γ stimulation of RAW264.7 cells.

Fig.6 mRNA expression of TNF⁃α(A), IL⁃1β(B), IL⁃16(C) and M2(D) IL⁃10 macrophage markers in RAW264.7 cells after different treatments, as evaluated by RT⁃qPCR analysisData are mean ± SD（n=3）； ####P<0.0001， ###P<0.001 vs. Control group， *P<0.05， **P<0.01， ***P<0.001， ****P<0.0001 vs. LPS+IFN- γ group； ns indicates no statistical significance.

Fig.7 Immunofluorescence images showing expression of proinflammatory factor iNOS(A—D) and anti⁃inflammatory factor CD206(E—H), along with quantitative analysis of iNOS⁃positive(I) and CD206⁃positive cells(J)####P<0.0001， ###P<0.001 vs. Control group， *P<0.05， **P<0.01， ***P<0.001， ****P<0.0001 vs. LPS+IFN- γ group； ns indicates no statistical significance.

Fig.8 TNF⁃α (A), IL⁃1β (B), IL⁃16 (C) and M2 (D) IL⁃10 macrophage markers in RAW264.7 cells after different treatments, as evaluated by ELISA analysisData are mean ± SD （n=3）； ####P<0.0001， ###P<0.001 vs. Control group， *P<0.05， **P<0.01， ***P<0.001， ****P<0.0001 vs. LPS+IFN-γ group； ns indicates no statistical significance.

参考文献 32

[1]	Mills C. D.， Ley K.， J. Innate Immun.， 2014， 6（6）， 716—726
[2]	Deng L. S.， Jian Z. J.， Xu T.， Li F. Q.， Deng H. D.， Zhou Y. C.， Lai S. Y.， Xu Z. W.， Zhu L.， Molecules， 2023， 28（5）， 2379
[3]	Pliouta L.， Lampsas S.， Kountouri A.， Korakas E.， Thymis J.， Kassi E.， Oikonomou E.， Ikonomidis I.， Lambadiari V.， J. Clin. Med.， 2025， 14（11）， 3706
[4]	Mohapatra A.， Rajendrakumar S. K.， Chandrasekaran G.， Revuri V.， Sathiyamoorthy P.， Lee Y. K.， Lee J. H.， Choi S. Y.， Park I. K.， ACS Appl. Mater. Interfaces， 2023， 15（3）， 3812—3825
[5]	Chen Y.， Chen N.， Wang J.， Li S. Q.， Acta Biochim. Pol.， 2023， 70（1）， 77—82
[6]	Wang Y. T.， Fu X.， Li H.J.， Front. Endocrinol.， 2025， 16， 1520835
[7]	Sarmiento⁃Salinas F. L.， Perez⁃Gonzalez A.， Acosta⁃Casique A.， Ix⁃Ballote A.， Diaz A.， Trevino S.， Rosas⁃Murrieta N. H.， Millan⁃Perez⁃ Pena L.， Maycotte P.， Life Sci.， 2021， 284， 119942
[8]	Zhao T. J.， Wu W.， Sui L. H.， Huang Q.， Nan Y. Y.， Liu J. H.， Ai K. L.， Bioact. Mater.， 2022， 7， 47—72
[9]	Li C. L.， Deng C. S.， Wang S. W.， Dong X.， Dai B.， Guo W. D.， Guo Q. Q.， Feng Y. L.， Xu H. D.， Song X. Y.， Cao L.， Redox Biol.， 2024， 70， 103059
[10]	Vadevoo S. M. P.， Kang Y. L.， Gunassekaran G. R.， Lee S. M.， Park M. S.， Jo D. G.， Kim S. K.， Lee H.， Kim W. J.， Lee B. Y. H.， Theranostics， 2024， 14（6）， 2605—2621
[11]	Chen R. J.， Zheng S. M.， Zhao X. Y.， Huang H. R.， Xu Y. T. H.， Qiu C. Y.， Li S. J.， Liang X. D.， Mao P. F.， Yan Y. Q.， Lin Y. H.， Song S. N.， Cai W. J.， Guan H. X.， Yao Y. S.， Zhu W. L.， Shi X. B.， Ganapathy V.， Kou L. F.， J. Control. Release， 2025， 380， 469—489
[12]	Nelson K. M.， Dahlin J. L.， Bisson J.， Graham J.， Pauli G. F.， Walters M. A.， J. Med. Chem.， 2017， 60（5）， 1620—1637
[13]	Gorabi A. M.， Razi B.， Aslani S.， Abbasifard M.， Imani D.， Sathyapalan T.， Sahebkar A.， Cytokine， 2021， 143， 155541
[14]	Benameur T.， Gaban S. V. F.， Giacomucci G.， Filannino F. M.， Trotta T.， Polito R.， Messina G.， Porro C.， Panaro M. A.， Molecules， 2023， 28（2）， 742
[15]	Li Z.， Hao K.， He C. L.， Tian H. Y.， Chem. J. Chinese Universities， 2023， 44（10）， 20230154
	李真，郝凯，贺超良，田华雨. 高等学校化学学报， 2023， 44（10）， 20230154
[16]	Rainey N. E.， Moustapha A.， Saric A.， Nicolas G.， Sureau F.， Petit P. X.， Cell Death Discov.， 2019， 5， 150
[17]	Li D. Y.， Zhang C. J.， Gao Z. S.， Xia N.， Wu C.， Liu C.， Tian H.， Mei X. F.， Mol. Pharmaceut.， 2023， 20（9）， 4453—4467
[18]	Liao D. H.， Shangguan D. G.， Wu Y.， Chen Y.， Liu N.， Tang J. Y.， Yao D. W.， Shi Y. R.， Psychopharmacology， 2023， 240（5）， 1179—1190
[19]	Wang Y.， Li C. Y.， Wan Y.， Qi M. L.， Chen Q. H.， Sun Y.， Sun X. L.， Fang J.， Fu L.， Xu L.， Dong B.， Wang L.， Small， 2021， 17（41）， 2101505
[20]	Yuan R. Y. K.， Li Y. Q.， Han S.， Chen X. X.， Chen J. Q.， He J.， Gao H. W.， Yang Y.， Yang S. L.， Yang Y.， ACS Cent. Sci.， 2022， 8（1）， 10—21
[21]	Jin Y. N.， Yang S. Q.， Li F. F.， Zhang Y. Y.， Zhao T. Y.， Cheng S. Q.， Mei X. H.， J. Food Eng.， 2024， 371， 111994
[22]	Li S. Y.， Wei N.， Wei J.， Fang C. L.， Feng T.， Liu F. F.， Liu X.， Wu B.， Int. J. Biol. Macromol.， 2024， 266， 131248
[23]	Liu X. L.， Chen B. H.， Chen J. Q.， Wang X.， Dai X. F.， Li Y. Q.， Zhou H. Y.， Wu L. M.， Liu Z.， Yang Y.， Adv. Mater.， 2024， 36（2）， 2308477
[24]	Jiang C. X.， Shi Q. Z.， Yang J.， Ren H.， Zhang L.， Chen S.， Si J. Y.， Liu Y. H.， Sha D. J.， Xu B.， Ni J.， J. Adv. Res.， 2024， 63， 159—170
[25]	Mehmood R.， Ariotti N.， Yang J. L.， Koshy P.， Sorrell C. C.， ACS Biomater. Sci. Eng.， 2018， 4（3）， 1064—1072
[26]	Deshpande S.， Patil S.， Kuchibhatla S. V. N. T.， Seal S.， Appl. Phys. Lett.， 2005， 87（13）， 133113
[27]	Wang F.， Li J. Q.， Chen C. Y.， Lan Y. P.， Sohn H. Y.， Murali A.， Zhang W.， Zhang J. S.， Wang Q.， Liu L.， Mol. Catal.， 2023， 549， 113507
[28]	Mary C. P. V.， Vijayakumar S.， Shankar R.， J. Mol. Graph. Model.， 2018， 79， 1—14
[29]	Gao Y. Y.， Liu K. L.， Zhang Y. C.， Sun Z. Y.， Song B.， Wang Y.， Zhang B.， Chen X.， Hu D. T.， Wen J. P.， Wang H.， Wang K.， Wang L.， Carbohydr. Polym.， 2023， 310， 120668
[30]	Peng W. C.， Tai W. B.， Li B. W.， Wang H.， Wang T.， Guo S. Y.， Zhang X.， Dong P. Y.， Tian C. Y.， Feng S. Y.， Yang L.， Cheng G.， Zheng B.， Nat. Mater.， 2025， 24（4）， 637—648
[31]	Liang L. X.， Song A. Q.， Zhou Y.， Sun P.， Wang D. Q.， Wei J.， Chem. J. Chinese Universities， 2024， 45（7）， 20240169
	梁露娴，宋安琪，周扬，孙平，王德强，魏杰. 高等学校化学学报， 2024， 45（7）， 20240169
[32]	Yang Y.， Wu M. Y.， Zhang X. L.， Zhao Y. L.， Zhou S. T.， Ji W. B.， Liu H. G.， Agriculture， 2024， 14（7）， 992