可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究

高等学校化学学报 ›› 2001, Vol. 22 ›› Issue (12): 1976.

可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究

齐小杰¹, 王琳¹, 方芳¹, 阎锡蕴², 丁兰¹, 赵大庆¹, 倪嘉缵¹

1. 中国科学院长春应用化学研究所, 长春 130022;
2. 中国科学院微生物研究所, 北京 100080

收稿日期:2000-12-22 出版日期:2001-12-24 发布日期:2001-12-24
通讯作者: 丁　兰(1967年出生),女,博士,副研究员,从事抗体酶研究.
基金资助:
中国科学院基础局重大项目(批准号:KJ951-A1-504-02);国家自然科学基金(批准号:29701005)资助

Studies of Soluble Human Catalytic Antibody with Glutathione Peroxidase Activity

QI XiaoJie¹, WANG Lin¹, FANG Fang¹, YAN XiYun², DING Lan¹, ZHAO DaQing¹, NI JiaZuan¹

1. Changchun Institute of Applied Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Changchun3002 China;
2. Institute of Microbiology, Chinese

Received:2000-12-22 Online:2001-12-24 Published:2001-12-24

摘要/Abstract

摘要： 对噬菌体展示人单链抗体库进行筛选,得到与半抗原S-二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯特异结合的单链抗体3B10.用计算机模拟分析了单链抗体的空间结构,发现抗原结合的CDR3区位于抗体的表面,推测其可能进一步参加硒化反应.利用突变引物,在大肠杆菌中表达了可溶性抗体蛋白,并用化学方法将催化必需基团硒代半胱氨酸(Sec)组装到3B10抗原结合部位,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的人源抗体酶.动力学研究结果表明,抗体酶和天然酶一样,符合乒乓反应机制.

关键词: 谷胱甘肽过氧化物酶, 人源抗体酶, 可溶性表达

Abstract: By screening the phagedisplayed human single chain antibody library, we have got the specific single chain antibody bound to GSHSDNPbutyl ester as the hapten. The tertiary structure of the protein was analyzed with the aid of computer, and the results showed the CDR3 region located on the surface of the antibody. The soluble antibody was expressed in E.coli. and the active site serine was converted into selenocysteine with the chemical modifying method, which resulted in the catalytic antibody with GPx activity of 80 U/μmol. Furthermore, the same PingPong mechanism as the natural GPx was observed when the kinetic behavior of the antibody was studied.

Key words: Glutathione peroxidase, Human catalytic antibody, Soluble expression

中图分类号:

O622

TrendMD:

齐小杰, 王琳, 方芳, 阎锡蕴, 丁兰, 赵大庆, 倪嘉缵. 可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究. 高等学校化学学报, 2001, 22(12): 1976.

QI XiaoJie, WANG Lin, FANG Fang, YAN XiYun, DING Lan, ZHAO DaQing, NI JiaZuan. Studies of Soluble Human Catalytic Antibody with Glutathione Peroxidase Activity. Chem. J. Chinese Universities, 2001, 22(12): 1976.

[1]	尹居鑫, 李祖宏, 牟颖, 吕绍武, 罗贵民. 具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒三肽[J]. 高等学校化学学报, 2016, 37(7): 1302.
[2]	郭笑, 于扬, 陈龙, 王铭铄, 金梦梦, 刘广娜, 张黎, 李涛, 高壮, 魏景艳. 基于快速定点突变研究含硒人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶1c-1c的催化活性[J]. 高等学校化学学报, 2014, 35(10): 2109.
[3]	吕冰聪, 董森, 薛峤, 宗慧, 吕绍武, 罗贵民. 具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含碲环糊精衍生物[J]. 高等学校化学学报, 2013, 34(9): 2146.
[4]	邹险峰, 吕绍武. 具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒四肽(SecRGD)[J]. 高等学校化学学报, 2012, 33(05): 983.
[5]	李唤民, 高楠, 刘磊, 申斯乐, 罗贵民. 新型兼具GPX, SOD, CAT活性的水杨醛Schiff碱衍生物的合成[J]. 高等学校化学学报, 2009, 30(7): 1353.
[6]	徐俊杰,王诗雯,赵虹,陈桂秋,霍锐,田莉,段玉晶,李敏杰,杨柏,魏景艳 . 量子点与人源抗谷胱甘肽单链抗体的连接与表征[J]. 高等学校化学学报, 2009, 30(3): 506.
[7]	霍锐,石毅,魏景艳,徐俊杰,吕绍武,闫飞,苏家明,段玉晶,王诗雯,丛登立, 李唯, 闫岗林, 罗贵民. 具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备[J]. 高等学校化学学报, 2008, 29(7): 1379.
[8]	郑清川,吕绍武,赵勇山,牟颖,罗贵民,孙家锺 . GSH对两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物活性影响的研究[J]. 高等学校化学学报, 2008, 29(12): 2337.
[9]	陈佳,张博珣,安洋,洪水声,姜广志,冯德日,房向阳,刘兰英 . 以透明质酸为骨架的新型谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟酶的制备及性质研究[J]. 高等学校化学学报, 2006, 27(11): 2110.
[10]	时成波, 刘俊秋, 罗贵民, 阎岗林. 具有GPX活力的抗体片段Fv的制备和性质[J]. 高等学校化学学报, 2000, 21(4): 566.
[11]	吴一卉, 马雪艳, 丁兰, 刘兰英, 赵大庆, 倪嘉缵. 具有cGPX活力的含硒抗体酶的酶学及动力学性质研究[J]. 高等学校化学学报, 2000, 21(11): 1621.
[12]	马雪艳, 吴一卉, 丁兰, 赵大庆, 倪嘉缵, 刘育. 三种含硒环糊精的SeGPX活力及对HO·的清除作用[J]. 高等学校化学学报, 1999, 20(8): 1163.
[13]	刘俊秋, 宁云刚, 时成波, 罗贵民, 阎岗林, 沈家骢. 硒代β-环糊精模拟谷胱甘肽过氧化物酶的研究——6-位硒桥联β-环糊精的合成、性质及表征[J]. 高等学校化学学报, 1998, 19(9): 1446.
[14]	马万超, 罗贵民, 王宗睦, 黄仲立, 杨同书. 谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的合成及其催化机理研究[J]. 高等学校化学学报, 1993, 14(1): 141.